產品名稱 | 規格 | 貨號 |
磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）生化檢測試劑盒 | 100管/96樣 50管/48樣 | EY-01S1373 |
測定意義：
PEPCK（EC 4.1.1.32）廣泛存在于動物、植物、微生物和細胞中，催化草酰乙酸轉化為磷酸烯醇式丙酮酸，是調節糖異生途徑的關鍵酶。
測定原理：
PEPCK催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸和CO2，丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進一步依次催化NADH氧化生成NAD+，在340nm下測定NADH下降速率，即可反映PEPCK活性。
需自備的儀器和用品：
分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑一：液體×1瓶，室溫保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×2瓶，－20℃保存。臨用前加入22mL試劑二，現配現用。
試劑四：液體×1支，4℃保存。
1、組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿。16000g，4℃離心20min，取上清置冰上待測。
2、細菌、真菌：按照細胞數量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；16000g， 4℃離心20min，取上清液置冰上待測。
3、血清等液體：直接測定。
（1）按照蛋白濃度計算
活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(Cpr×V樣)÷T
=1608×△÷Cpr
（2）按照樣本質量計算
活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/g鮮重) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=1608×△A÷W
（3）按細胞數量計算
活性單位定義：25℃中每104個細胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反總×109)÷(細胞數量×V樣÷V樣總)÷T
=1608×△A ÷細胞數量
（4）按液體體積計算
活性單位定義：25℃中每毫升血清每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷V樣÷T
=1608×△A
ε：NADH摩爾消光系數，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光徑，1 cm；V反總：反應體系總體積，1000μL=0.001 L；Cpr：上清液蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；V樣：加入反應體系中上清液體積，100μL=0.1 mL；T：反應時間，1min。
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