傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)和生長密度，當細胞生長密度達到80%~90%時，即可進行傳代。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶內(nèi)加入適量含EDTA的，一般應覆蓋整個培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進行觀察，當發(fā)現(xiàn)有70%~80%細胞收縮變圓、細胞間隙變大時，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過度。

（5）吸出所有細胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細胞，輕輕吹打混勻，使細胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間，甚至進行細胞凍存。

HPT-8人飼養(yǎng)層上皮細胞

細胞基本屬性：

細胞詳細介紹：

二、懸浮細胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實驗室中懸浮細胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細胞碎片的情況下）。當在顯微鏡下觀察到懸浮細胞已經(jīng)長滿至80%~90%（細胞懸液變黃）時，即可進行傳代。

（1）嚴格進行無菌操作，所用一切試劑及耗材均應無菌，且須在無菌超凈工作臺中紫外照射30min以上，以免細胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細胞生存和生長。來源于不同動物種類、組織類型的細胞，對培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時可用預實驗的方法選擇適當?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清對于維持細胞生存，促進細胞生長起著關(guān)鍵作用。可根據(jù)文獻或預實驗選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應保持用至實驗完成。

（4）消化細胞時應避免消化時間過短導致消化不收集到的細胞數(shù)量少，或消化時間過長導致細胞成團塊樣絮狀游離，這時的細胞已有損傷或死亡，影響細胞數(shù)量和實驗進度。

（5）細胞離心的時候應避免離心力過小收集的細胞數(shù)量不夠，或離心力過大對細胞產(chǎn)生損傷。離心后的細胞沉淀棄去上清后，應先彈散細胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打?qū)毎麚p傷小，可以提高細胞活率。

（6）吹打細胞時應盡量避免細胞的產(chǎn)生，以免損傷細胞，影響細胞狀態(tài)（吹打過程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）。

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Flotillin 2： 表皮細胞表面抗原1抗體 人腸平滑肌細胞RNAHISMC miRNA5 μg

GRC-1細胞，人腎癌細胞 鼠纖維肉瘤細胞系,WEHI 164細胞 CL-0446SUP-B15(人Ph+急淋白血病細胞系)5×106cells/瓶×2 兔細胞間粘附分子1(ICAM-1)ELISA試劑盒 Goat Anti-Bovine IgG/Gold 膠體金標記的羊抗IgG 0.5ml

Factor IX： 9抗體 EFNA5 Others Mouse 小鼠 EFNA5 / Ephrin-A5 人細胞裂解液 (陽性對照)

MN-h, 小鼠海馬神經(jīng)元 兔透明質(zhì)酸(HA)ELISA 試劑盒 Goat Anti-Bovine IgG/Cy5.5 Cy5.5標記的羊抗IgG 0.1ml

Factor X： 10抗體 H9c2大鼠心肌細胞(ATCC來源) Rattus

TNFSF11 Others Mouse 小鼠 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 人細胞裂解液 (陽性對照) 大鼠(Pepsin)ELISA 試劑盒 HL(Mouse hepatic lipase)  小鼠肝脂酶 96T

MTGR1： 髓易位基因相關(guān)蛋白1抗體 人少突膠質(zhì)前體細胞(懸浮生長)cDNAHOPC-os cDNA

L W-3A小鼠皮下結(jié)締組織細胞 L W-3A mice subcutaneous connective tissue cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS 大鼠胃腸癌標志物CA199ELISA 試劑盒 UK  大鼠 96T

BBS6： 巴德-畢德氏綜合征蛋白BBS6抗體 HA Others H2N2 甲型流感 H2N2 (A/Japan/305/1957) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照)

CL-0282HO-8910PM(人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細胞)5×106cells/瓶×2 大鼠尾加壓素II(Urotensin II) ELISA試劑盒 VCAM-1/CD106(Human Vascuolar cell adhesion molecule 1)  人血管內(nèi)皮細胞粘附分子1 96T

HPT-8人飼養(yǎng)層上皮細胞Phospho-IRAK1 (Thr209)： 0酸化白介素-1受體相關(guān)激酶1抗體 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY0923

NIH/3T3(小鼠胚胎細胞) 5×106cells/瓶×2 人 EVI2A 人細胞裂解液 (陽性對照) 人成骨生長肽(OGP)ELISA 試劑盒 Inhibin beta A peptide 抑制素beta A抗原 0.5mg

Phospho-IRAK1 (Thr387)： 0酸化白介素-1受體相關(guān)激酶1抗體 小鼠顆粒細胞MGC

CCL1 Protein Human 重組人 I-309 / CCL1 / TCA-3 蛋白 人超氧化物歧化酶(SOD)ELISA 試劑盒 Inhibin beta B 抑制素βB抗原 0.5mg

IRF3： 干擾素調(diào)節(jié)因子3 0.1ml