原代細胞的分離培養：
原代培養即直接從有機體取下細胞、組織或器官，讓它們在體外維持與生長。原代培養的特點是細胞或組織剛離開機體，它們的生物性狀尚未發生很大的改變，在一定程度上可反映它們在體內的狀態，表現出來源組織或細胞的特性， 因此用于藥物實驗，尤其是藥物對細胞活動、結構、代謝、有無毒性或殺傷作用等，是的工具。常用的原代培養法有組織塊培養法和消化培養法。
（一）組織塊培養法
許多實驗室喜歡用組織塊培養法進行原代培養，因為方法簡單，細胞也較容易生長。尤其是培養心肌，有時還可觀察到心肌組織塊搏動。細胞從組織塊邊緣向外長出并鋪滿培養皿或培養瓶后， 即可進行傳代。
1. 設備材料
培養箱、冰箱、超凈工作臺／無菌間、無菌吸管、離心管、酒精燈、試管架、培養瓶、培養皿、消化液、基礎培養液、胎牛血清、Hanks 溶液、雙抗試液、剪刀、攝子、小燒杯。
2. 操作步驟
（1） 在無菌條件下，取待培養的組織適量，置入小燒杯中， 以適量Hanks 溶液清洗2~3 次，去掉組織塊表面的血污。
（2）用眼科剪將組織塊反復剪成0.5~ 1mm3的小塊。
（3）再用Hanks 溶液反復漂洗， 直至液體不混濁為止。等組織塊下沉，將燒杯傾斜，用小吸管盡量吸除Hanks 溶液。
（4）用含20%滅活血清及雙抗溶液(200U/ml、200μg/ml）的培養液再清洗，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培養液。
（5）用彎頭吸管吸取組織小塊，均勻地置于培養皿內表面，吸去多余的培養液，各組織小塊之間相距0.5cm 為宜。蓋好培養皿蓋，做好標記， 置37°C 的CO2培養箱內。
（6） 2~4h 后，于超凈工作臺中，緩緩地向培養皿中加入上述含20％血清及雙抗溶液( 100U/ml 及100μg/ml ）的培養液少量，以使組織塊浸沒在培養液中。
（7）輕輕地將培養皿及組織塊移至CO2 培養箱， 如無特殊情況，不必觀察。1~2 周后，可觀察到細胞從組織塊邊緣長出，形成生長暈。
（9） 一般說來，若培養液無明顯改變， 1 周換液1 次即可。待細胞長滿整個培養皿內表面，即可進行傳代培養。
小鼠骨骼肌成纖維細胞
細胞基本屬性：
產品名稱 | 小鼠骨骼肌成纖維細胞 | 組織來源 | 骨骼肌組織 |
種屬 | 小鼠 | 生長特性 | 貼壁生長 |
形態特征 | 成纖維細胞樣 | 英文名稱 | Skeletal Muscle Fibroblasts Cells |
貨號 | EY-XY3689 | 規格 | 5x105cells/T25或1mL凍存管 |
質量檢測：波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色為陽性，純度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等
產品規格：5x105cells/T25或1mL凍存管
培養基：小鼠骨骼肌成纖維細胞培養基
培養條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
換液頻率：每2-3天換液一次
消化液：0.25%
產品貨期現貨，1周左右
運輸方式T25培養瓶/ 順豐快遞（包郵）
供應限制僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用
背景介紹：
小鼠骨骼肌成纖維細胞采用膠原酶消化法結合差速貼壁法制備而來，小鼠骨骼肌成纖維細胞分離自四肢肌肉組織；骨骼肌又稱橫紋肌，肌肉中的一種，約占全身重量的40%。骨骼肌纖維為長柱形的多核細胞，肌膜的外面有基膜緊密貼附。屬于橫紋肌，橫紋肌還包括心肌與內臟橫紋肌，其中骨骼肌主要分布于四肢。每塊肌肉都是具有一定形態、結構和功能的器官，有豐富的血管、淋巴分布，在軀體神經支配下收縮或舒張，進行隨意運動。肌肉可根據共形狀、大小、位置、起止點、纖維方向和作用等命名。依形態命名的如斜方肌、菱形肌、三角肌、梨狀肌等。 |
公司正在出售的產品：
新型分泌細胞表面蛋白/成骨細胞相關蛋白SCUBE3抗體
細胞蘋果酸酶（Malic enzyme）活性比色法定量檢測試劑盒
持久型ECL免疫印跡化學發光溶液
JM109細菌
石蠟切片組織TRAIL 蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒
通用型艱難梭菌（Clostridium difficile）基因檢測試劑盒
冰凍切片制片處理試劑盒
血液磷酸二酯酶5（PDE5）活性熒光定量檢測試劑盒
真菌/酵母細胞內氧化應激活性氧（ROS）熒光測定試劑盒（過氧亞硝基陰離子）
冰凍切片中性脂質蘇丹黑染色試劑盒
細胞羥賴（hydroxylisine）含量比色法定量檢測試劑盒
CDK3蛋白免疫共沉淀分析試劑盒
營養補充劑L-天化學比色法定量檢測試劑盒
細胞脘蛋白（PRION）蛋白表達比色法定量檢測試劑盒
組織肌酸激酶同工酶肌肉型（CK-MM）活性比色法定量檢測試劑盒
全血基因組/線粒體DNA同步萃取試劑盒
著絲粒蛋白O抗體
肝再生磷酸酯酶2抗體
染色質結合蛋白Cbx8單克隆抗體
KIAA1468蛋白抗體
細胞內流鉀通道蛋白Kir5.1抗體
β1-6 N-乙酰氨基糖轉移酶6抗體
酪蛋白激酶SgK223抗體
小鼠骨骼肌成纖維細胞ATP依賴性解旋酶ATRX抗體
操作方法：
組織塊直接培養法（原代細胞培養實驗）
材料與儀器
【動物】選擇大約一半足孕時間的胚胎，10－13天齡胚胎含有最大數量的未分化的間質細胞，成纖維細胞可從這些細胞衍生獲得。每組小鼠胚胎1個【實驗材料】每組的超凈臺中有以下物品：1.50ml配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛血清（FCS)1瓶；100ml 0.25%瓶；PBS(-)1瓶2.100ml滅菌燒杯2個；3、50ml離心筒2個4、滅菌培養皿1個，細胞培養瓶1個5、1ml，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個6、細胞計數板1塊；7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；8、酒精燈1臺；
步驟
1) 胚胎的分離。適用哺乳動物(倉鼠、小鼠和大鼠)2)將1－2個胚胎轉移至一個小的無菌培養皿中，用新的無菌剪刀小心地絞碎胚胎，用PBS漂洗。3)在無菌狀態下，將絞碎的胚胎轉移于一50ml的無菌離心筒中,加入40ml 0.25％的無菌,用攪拌棒輕輕攪動。4)在溫暖的環境中或置于37°C培養箱中輕輕搖動15分鐘。5)讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降，將含有懸浮細胞的液體轉移至一無菌50ml的離心管中，該管內按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以滅活,。6)加人新鮮溶液(見前述步驟)于含有殘留未消化組織塊的原來的50ml離心筒中，重復步驟4和5。7)離心混合的細胞懸液，1200r/rain，5分鐘，棄上清。8)用新鮮的無菌PBS重懸沉淀的細胞，按步驟7再次離心。9)用PBS反復洗滌細胞直至上清清亮為止。
© 2025 上海一研生物科技有限公司版權所有 
滬ICP備14030958號-14 管理登陸 技術支持：化工儀器網 GoogleSitemap
